飼料中苯甲酸檢測的固相萃取方法

（PolyClean X-MAX）

一、實驗目的

本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC 法作為分析方法，檢測飼料中苯甲酸含量。該方法可簡化樣品的前處理過程，節(jié)省有機溶劑的使用，操作簡便。

二、實驗目標物

苯甲酸 (CAS:65-85-0)

三、應用范圍

本方法適用于飼料中苯甲酸的檢測的 HPLC 檢測及確證。四、參考標準

《NY/T 2297-2012 飼料中苯甲酸和山梨酸的測定高效液相色譜法》五、實驗材料

NuAnalytical PolyClean X-MAX 固相萃取柱 60 mg/3 mL。六、實驗方法

1、 樣品待測溶液制備

準確稱取飼料樣品 2.0 g 于 50 mL 離心管中，加入 2%  氨水水溶液（v/v）21 mL，超聲

提取 10 min，振蕩提取 10min，準確加入 0.25 mol/L 的亞鐵氰化鉀溶液 2 mL、1 mol/L 的乙酸鋅溶液 2 mL，渦旋混勻。5000 r/min 離心 5min，取上清液 5 mL 轉(zhuǎn)移至 25 mL 容量瓶中, 用 2%  氨水水溶液（v/v）定容至 25 mL，備用。

2、活化

依次用 3  mL 甲醇、3mL 水活化

3、上樣和洗脫

將在MAX 固相萃取柱上加入5 mL 備用樣品，棄去流出液；用3 mL 2 %氨水水溶液（v/v）、

3mL 甲醇淋洗，棄去淋洗液；抽干小柱；用 5 %甲酸甲醇溶液（v/v）2 mL 洗脫，收集洗脫液（整個上樣、洗脫過程保持流速 1 mL/min）。

4、重新溶解

洗脫液過 0.45 μm 濾膜，供 HPLC 測定。

5、HPLC 條件

色譜柱：SuperLu C18 (250×4.6mm, 5μm)

檢測器：Waters 2487  紫外雙波長檢測器；檢測波長： 230nm

流動相 ：A：乙腈    B：磷酸鹽緩沖溶液（磷酸二氫鉀 2.5g+磷酸氫二鉀 2.5 加水溶解定容到 1000mL）

洗脫方式：等度洗脫 A:B=10:90

流速：1.0 mL/min           進樣體積:    20 μL