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Titank C18 PITC 柱前衍生法檢測中 17 種氨基酸

色譜柱： Titank C18 柱 250 mm× 4.6 mm，5μm ; （貨號：FMG-5560-

E0NU）

柱溫: 35 ℃

檢測波長: 254 nm;

流速: 1.0 mL /min

進(jìn)樣量: 5μL

流動相: A:乙腈 B:0.1mol/L 醋酸鈉溶液

說明：使用 Titank C18 色譜柱，成功采用 PITC 柱前衍生法分析 17 種氨基酸，相鄰色譜峰分離度均大于 1. 5。 建議可用 Titank C18 3u 250*4.6mm(貨號：FMG-5559-EONU)獲得更大的分離度。

注釋：本應(yīng)用摘自 Journal of Chinese Medicinal Materials DOI:10.13863/j. issn1001-4454.2019.06.025 《 PITC 柱前衍生 HPLC 測定烏梅 17 種氨基酸的含量》

柱前衍生法是一種常用的氨基酸檢測方法，它通過衍生化反應(yīng)將氨基酸轉(zhuǎn)化為更易檢測的化合物，從而提高檢測的靈敏度和準(zhǔn)確性。在柱前衍生法檢測中，通常會涉及到多種氨基酸的測定，包括但不限于以下17種常見氨基酸：

### 1. 氨基酸種類

* **Asp（天冬氨酸）**

* **Thr（蘇氨酸）**

* **Ser（絲氨酸）**

* **Glu（谷氨酸）**

* **Pro（脯氨酸）**

* **Gly（甘氨酸）**

* **Ala（丙氨酸）**

* **Cys（胱氨酸）**（注意：有時也指半胱氨酸，具體取決于實驗條件和需求）

* **Val（纈氨酸）**

* **Met（蛋氨酸）**（也稱甲硫氨酸）

* **Ile（異亮氨酸）**

* **Leu（亮氨酸）**

* **Tyr（酪氨酸）**

* **Phe（苯丙氨酸）**

* **Lys（賴氨酸）**

* **His（組氨酸）**

* **Arg（精氨酸）**

* **Trp（色氨酸）**（注意：色氨酸在酸水解過程中可能會被破壞，因此在某些檢測方法中可能不包括在內(nèi)）

### 2. 柱前衍生法檢測步驟

柱前衍生法檢測氨基酸的一般步驟包括樣品前處理、衍生化反應(yīng)、高效液相色譜（HPLC）分析等。以下是一個簡化的流程：

#### 樣品前處理

* 將樣品中的蛋白質(zhì)通過酸水解（如鹽酸水解）轉(zhuǎn)化為游離氨基酸。

* 過濾或離心去除雜質(zhì)，得到純凈的游離氨基酸溶液。

#### 衍生化反應(yīng)

* 將游離氨基酸與衍生試劑（如異硫氰酸苯酯、鄰苯二甲醛等）反應(yīng)，生成具有紫外吸收或熒光特性的衍生物。

* 衍生化反應(yīng)通常在室溫下進(jìn)行，并需要一定的反應(yīng)時間（如1小時）。

#### 高效液相色譜分析

* 將衍生后的樣品注入HPLC系統(tǒng)進(jìn)行分析。

* 根據(jù)不同氨基酸衍生物在色譜柱上的保留時間和紫外吸收強(qiáng)度進(jìn)行定性和定量測定。

### 3. 柱前衍生法的優(yōu)點(diǎn)

* **高靈敏度**：通過衍生化反應(yīng)提高了氨基酸的檢測靈敏度。

* **高分辨率**：HPLC技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)多種氨基酸的有效分離。

* **準(zhǔn)確性高**：外標(biāo)法定量準(zhǔn)確可靠。

### 4. 注意事項

* 在進(jìn)行柱前衍生法檢測時，需要注意控制實驗條件（如溫度、pH值、反應(yīng)時間等），以確保衍生化反應(yīng)的完全性和一致性。

* 色氨酸在酸水解過程中可能會被破壞，因此在使用酸水解法時需要特別注意其穩(wěn)定性。

* 衍生試劑的選擇和用量也會影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和靈敏度，需要根據(jù)實驗條件進(jìn)行優(yōu)化。

綜上所述，柱前衍生法是一種有效且常用的氨基酸檢測方法，能夠準(zhǔn)確測定包括17種常見氨基酸在內(nèi)的多種氨基酸。在實際應(yīng)用中，需要根據(jù)實驗條件和需求選擇合適的衍生試劑和HPLC條件，以確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。